赛默飞TRIzolReagent提取试剂

赛默飞TRIzolReagent提取试剂

    在基因表达分析、qPCR及RNA测序等分子生物学研究中，高质量RNA的提取是实验成功的关键第一步。赛默飞TRIzolReagent提取试剂作为全球科研人员广泛使用的经典产品，凭借其高效的裂解能力和RNA保护性能，为从各类生物样本中获取高纯度总RNA提供了可靠的技术支持。其独特的单相溶液配方可在一小时内完成RNA提取，同时可兼提DNA和蛋白质，实现同一样本的多靶标分析。

    选择赛默飞TRIzolReagent提取试剂，意味着为您的RNA研究选择了一份经过全球实验室验证的标准化工具。

一、产品核心优势解析

    赛默飞TRIzolReagent提取试剂的设计聚焦于解决RNA提取中的核心挑战：如何在复杂样本中高效裂解细胞、抑制RNase活性，同时确保RNA的完整性与纯度。

    广泛的样本适用性

    该试剂已针对多种样本类型进行配方优化，可处理：

    动物组织（如肝脏、脑组织、心脏、骨骼肌）

    植物材料（叶片、根茎等）

    微生物（大肠杆菌、酵母等）

    血液、血清、病毒样本

    培养细胞（贴壁或悬浮）

    即使对于富含多糖的植物组织、高脂肪的动物组织或难以处理的细菌样本，TRIzolReagent提取试剂也能提供稳定的提取效果。

    高效裂解与RNA保护

    TRIzolReagent提取试剂的核心成分包含苯酚和异硫氰酸胍。这两种成分协同作用：

    异硫氰酸胍作为强变性剂，破坏细胞膜和核膜，释放RNA

    同时高效抑制RNase活性，防止RNA降解

    苯酚使蛋白质变性沉淀，在酸性条件下使RNA进入水相

    这种独特的配方设计，确保从样本匀浆开始就为RNA提供持续保护。

    同一样本多靶标分离

    该试剂支持从同一样本中顺序提取RNA、DNA和蛋白质。加入氯仿离心后，混合物分为三层：

    上层无色水相：含RNA

    中间层：含DNA

    下层红色有机相：含蛋白质

    这一特性使研究人员能够从珍贵的微量样本中获得更多分子信息。

二、核心规格与技术参数

    赛默飞TRIzolReagent提取试剂提供多种规格，满足不同规模实验室需求：

    货号规格适用样本量储存条件

    15596018CN200mL组织≤1g，细胞≤1×10⁷室温（15-30℃）

    15596026100mL组织≤1g，细胞≤1×10⁷室温（15-30℃）

    关键技术指标：

    提取时间：<1小时

    RNA纯度：A₂₆₀/A₂₈₀≥1.8（溶于蒸馏水时）

    产量参考：肝脏组织6-10µgRNA/mg组织；培养细胞5-15µgRNA/10⁶细胞

    经典提取流程与操作要点

    样本裂解

    根据样本类型采用不同的裂解方式：

    组织：每50-100mg组织加入1mLTRIzolReagent，用匀浆器充分匀浆

    贴壁细胞：直接加入TRIzolReagent（每10cm²培养面积加1mL），吹打裂解

    悬浮细胞：离心收集细胞后，每5-10×10⁶细胞加1mLTRIzolReagent，反复吹打

    重要提示：加入TRIzolReagent前不要洗涤细胞，否则可能增加mRNA降解风险。

    相分离

    匀浆后室温静置5分钟，使核蛋白复合物充分解离

    每1mLTRIzolReagent加入0.2mL氯仿（或0.1mLBCP替代品）

    盖紧管盖，剧烈震荡15秒，室温静置2-3分钟

    4℃12,000×g离心15分钟

    离心后混合物分为三层，上层无色水相即为含RNA的溶液。

    RNA沉淀与洗涤

    小心吸取上层水相至新管，避免接触中间层

    每1mL原TRIzolReagent加入0.5mL异丙醇，混匀后室温静置10分钟

    4℃12,000×g离心10分钟，管底可见白色胶状RNA沉淀

    弃上清，用75%乙醇洗涤沉淀（每1mLTRIzol加1mL乙醇）

    4℃7,500×g离心5分钟，弃上清，室温晾干5-10分钟

    关键提示：RNA沉淀不可完全干燥，否则会显著降低其溶解度。

    RNA溶解

    用20-50μL无RNase水或0.5%SDS溶液溶解RNA沉淀

    55-60℃孵育10-15分钟可促进完全溶解

    测定浓度后，-70℃保存备用

    微量样本处理的优化方案

    对于极少量样本（如<10⁶个细胞或<10mg组织），可采取以下优化措施：

    加入5-10μg无RNase的糖原作为核酸助沉剂，促进RNA沉淀

    推荐-20℃沉淀1小时至过夜，提高回收率

    对于RNase含量高的组织（如胰腺、肾上腺），可用100%去离子甲酰胺溶解RNA

    下游应用兼容性

    使用赛默飞TRIzolReagent提取试剂获得的RNA，可直接用于多种分子生物学实验：

    实时荧光定量PCR(qPCR)

    逆转录PCR(RT-PCR)

    Northernblot

    RNA测序(RNA-seq)

    cDNA文库构建

    核酸酶保护测定

    使用与保存指南

    储存条件

    未开封产品可在室温（15-30℃）避光保存

    已开封产品建议密闭保存，避免污染

    中间停止点

    匀浆后：加入氯仿前可于-70℃保存至少1年

    RNA沉淀后：异丙醇中的RNA可在4℃保存过夜（不要冷冻）

    RNA洗涤后：75%乙醇中的RNA可在4℃保存1周，-20℃保存1年

三、注意事项

    所有离心管、枪头及相关溶液需确保无RNase污染

    TRIzolReagent含有毒物质，操作时需佩戴手套和护眼罩，在通风橱内完成

    仅供科研使用，不可用于诊断目的

    文献支持与应用验证

    TRIzolReagent提取试剂已被广泛应用于各类科研领域，并被众多高水平期刊引用。代表性研究包括：

    小鼠脑组织RNA提取研究（发表于《BIO-PROTOCOL》）

    植物RNA提取比较研究（云南大学研究团队证实其在富含多糖的植物组织中表现优异）

    病毒RNA提取及RT-qPCR分析

    该产品已累计被254篇文献引用，包括《PNAS》《JournalofBiologicalChemistry》等知名期刊。

总结

    综上所述，赛默飞TRIzolReagent提取试剂凭借其广泛的样本适用性、高效的裂解能力以及可靠的RNA保护性能，成为RNA研究的理想选择。无论您从事基础研究、临床诊断还是农业生物技术开发，这款经典试剂都能为您的实验提供稳定可靠的RNA提取保障。根据样本类型和实验需求选择合适的规格，并遵循规范的操作流程，将有助于获得高质量的RNA样本，为下游实验奠定坚实基础。